Olanzapine激活AMPK上调自噬减轻Rotenone对多巴胺能神经元的损伤

【摘要】目的：研究奥氮平（Olanzapine,OLA）对rotenone诱导多巴胺（dopamine,DA）能神经元损伤的保护作用及其可能的机制。方法：（1）细胞实验：首先检测olanzapine对PC12细胞的毒性作用，采用Westernblot检测olanzapine对p-AMPK以及自噬相关蛋白LC3，p62，p70-s6k的影响，免疫荧光染色检测LC3的变化。采用0.5μMrotenone处理PC12细胞24h建立PD细胞模型，治疗组在rotenone给药前24h加入olanzapine（20μM）预处理，实验组以终浓度为2.5μM的AMPK选择性抑制剂compoundC预处理PC12细胞3h后再加入olanzapine及rotenone。采用CCK-8法检测细胞活性；Hoechst33258染色法观察细胞核形态变化；Westernblot法观察凋亡蛋白PARP及α-synuclein的表达情况。（2）动物实验：雄性Lewis大鼠52只随机分为4组：rotenone注射组的大鼠于颈背部皮下注射rotenone（1.5mg/kg/day）8周，治疗组在每天灌胃0.9mg/kgolanzapine，八周后观察其行为学变化，处死动物取脑、切片，免疫组化染色观察酪氨酸羟化酶（TH）、LC3及α-synuclein的表达。结果：Westernblot结果显示olanzapine能够显著激活AMPK并上调LC3II的表达，下调p62以及p70-s6k的水平，表明olanzapine能够激活自噬。CCK-8及Hoechst33258结果提示olanzapine能够减轻rotenone诱导的PC12细胞的凋亡，降低由rotenone引起的α-synuclein和PARP的增高。当抑制AMPK以后，自噬的诱导被阻碍并且保护作用消失。体内实验结果显示，olanzapine能够上调大鼠脑内LC3表达。治疗组的大鼠的行为计分显著低于模型组，治疗组的黑质致密部TH阳性细胞数较模型组明显增加，且残存的TH阳性细胞内的α-synuclein显著减少。结论：olanzapine可以减轻rotenone对多巴胺能神经元的损伤，这种保护作用可能是通过激活AMPK通路，上调自噬实现的。
【作者】宋云珍；
【导师】梁中琴；
【作者基本信息】苏州大学，药理学，2014，硕士
【关键词】帕金森病；Olanzapine；神经保护；AMPK；自噬；

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